ady狠狠射 眇小贴壁和悬浮培养的细胞
发布日期：2024-11-04 05:43 点击次数：129
一．细胞简介：
细胞称号：SK-BR-3东说念主乳腺癌细胞 平台编号:zl-056556
1970年G.Trempe和L.J.Old从胸水中设立了这株细胞。莫得病毒颗粒。超微结构特征包括微丝和桥粒，肝糖原颗粒，大溶酶体，成束的细胞质纤丝。SK-BR-3细胞株过抒发HER2/c-erb-2基因产物。
细胞特色
1）着手：器官：乳腺；乳房疾病：腺癌取材调养灶：胸水
2）口头：上皮细胞样，贴壁滋长
3）含量：>1x106细胞数
4）规格：T25瓶粗略1mL冻存管包装
5)用途：仅供科研使用。
二．细胞的培养：
1）准备McCOY's5A(iCell-0011含NaHCO32.2g/L)或DMEM（含NaHCO31.5g/L；)培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。
2）持重:该细胞在DMEM(含1.5g/LNaHCO3)培养基中滋长邃密，大部分品牌的DMEM含有较高浓度的NaHCO3（3.7g/L），若使用DMEM（3.7g/LNaHCO3）培养基培养细胞时需要进步CO2浓度（7%-10%）。复苏初期细胞贴壁不牢，会有悬浮细胞出现，在传代和换液时持重回收（1000rpm5min）悬浮的细胞。细胞滋长交融到80%以后会有悬浮细胞出现。
3）培养条目：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
4）冻存液：90%血清，10%DMSOady狠狠射，现用现配。
三．细胞处置：
1）冻存细胞的复苏：
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中马上摇晃解冻ady狠狠射，加入到含4-6mL整个培养基的离心管中搀杂均匀。在1000RPM条目下离心3-5minady狠狠射，弃去上清液，整个培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml整个培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下不雅察细胞滋长情况和细胞密度。
2）细胞传代：若是细胞密度达70%-90%，即可进行传代培养。
该细胞眇小贴壁和悬浮培养的细胞，传代不错参考以下措施：
1.收罗：将培养瓶中的悬浮的细胞收罗到离心管中。用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。由于细胞贴壁不牢PBS润洗后细胞会零碎是以PBS也要回收到离心管中。
2.加入0.25％（w/v）胰卵白酶-0.53mMEDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞不错适合延迟消化时间），然后在显微镜下不雅察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并零碎马上拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10